Matthew Macfadyen est le fils de Martin Macfadyen, industriel, et de Meinir Macfadyen, actrice et professeur de théâtre.
Il a un frère, Jamie, de deux ans son cadet. Durant son enfance, il a séjourné successivement à Londres, à Aberdeen (où il a fréquenté le Robert Gordon's College) et à Dundee en Ecosse, à Louth dans le Lincolnshire (où il a fréquenté la Kidgate Primary School) ainsi qu'à Jakarta en Indonésie.
De 1985 à 1992, il a été élève de l'Oakham School dans le comté de Rutland, où il a fait des études de théâtre. Il a ensuite été élève, de 1992 à 1995, de la prestigieuse Royal Academy of Dramatic Art[1] à Londres, dont il est membre sociétaire[2].
Il est marié à l'actrice Keeley Hawes et vit à Twickenham avec leurs trois enfants.
2000 : Maybe Baby [ ou Comment les Anglais se reproduisent ], de Ben Elton (Nigel) - d'après le livre Inconceivable du même [31]
2001 : Enigma, de Michael Apted (Cave) - d'après l'œuvre de Robert Harris [32]
2003 : The Reckoning, de Paul McGuigan (le juge du roi) - d'après le livre Morality Play de Barry Unsworth [33]
2004 : In My Father's Den, de Brad McGann (Paul Prior) - d'après l'œuvre de Maurice Gee [34]
2005 : Pride & Prejudice [ Orgueil et préjugés ], de Joe Wright (Fitzwilliam Darcy) - d'après l'œuvre de Jane Austen [35]
2006 : Middletown, de Brian Kirk (Gabriel Hunter) [36]
2007 : Don't [ bande annonce entre les deux parties du film Grindhouse ], d'Edgar Wright (anonyme)
2007 : Death at a Funeral [ Joyeuses funérailles ], de Frank Oz (Daniel Howells) [37]
2008 : Incendiary, de Sharon Maguire (Terence Butcher) - d'après l'œuvre de Chris Cleave [38]
2008 : Frost/Nixon, de Ron Howard (John Birt) - d'après la pièce de Peter Morgan